生化實(shí)驗(yàn)心得
生化實(shí)驗(yàn)心得
劉欣怡201*00140057201*級(jí)生物基地班我很喜歡做實(shí)驗(yàn),并且樂于鍛煉自己的動(dòng)手能力。
本學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn),雖然只從第二周上到第十五周,但是我收獲了很多并且留下了深刻的印象。對(duì)于本次實(shí)驗(yàn)心得的撰寫,我將分為以下3個(gè)部分來(lái)進(jìn)行:本學(xué)期實(shí)驗(yàn)回顧、本學(xué)期實(shí)驗(yàn)總結(jié)以及對(duì)于生化實(shí)驗(yàn)課的支持和建議。一、本學(xué)期實(shí)驗(yàn)回顧:
本學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn)課上,我們一共進(jìn)行了11次實(shí)驗(yàn),分別是Folin-酚試劑法測(cè)定血清蛋白質(zhì)含量、酵母RNA的提取、醋酸纖維薄膜電泳、紫外吸收法測(cè)定RNA含量、聚酰胺薄膜層析、纖維素酶活力的測(cè)定(三硝基水楊酸法)、還原糖和總糖含量的測(cè)定(三硝基水楊酸法)、酶最適PH的測(cè)定、費(fèi)林試劑熱滴定糖、肌糖原酵解作用、微量凱氏定氮法。這些實(shí)驗(yàn)具有代表性,是典型的生化實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中,涵蓋了以前無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)操作,還有全新的實(shí)驗(yàn)操作以及實(shí)驗(yàn)儀器。
在這學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn)課上,我既復(fù)習(xí)并熟練了大一無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)實(shí)驗(yàn)的基本實(shí)驗(yàn)操作和儀器(比如移液管、滴定管、蒸餾等),又學(xué)習(xí)并掌握了許多新操作以及新儀器的使用,比如紫外分光光度計(jì)、離心機(jī)、聚酰胺薄膜、熱滴定、凱氏定氮儀器等。最重要的是,我學(xué)習(xí)并掌握了一些重要的實(shí)驗(yàn)方法和原理,比如Folin-酚試劑法、紫外吸收法、三硝基水楊酸法、費(fèi)林試劑與糖的反應(yīng)、微量凱氏定氮法等。掌握了這些實(shí)驗(yàn)原理以及方法,有利于我們?cè)谝院笾徐`活運(yùn)用設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。
總體來(lái)說,本學(xué)期生化實(shí)驗(yàn)教會(huì)了我測(cè)定蛋白質(zhì)、糖、核酸的方法,電泳和層析分離物質(zhì)、如何測(cè)定酶的相關(guān)特性、驗(yàn)證肌糖原酵解作用、如何提取RNA。二、本學(xué)期實(shí)驗(yàn)總結(jié)
通過這學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn),我的實(shí)驗(yàn)技能的到了大大地提升,同時(shí),實(shí)驗(yàn)中的細(xì)節(jié)、注意事項(xiàng)以及老師拓展的知識(shí)令我獲益匪淺,也讓我深深地認(rèn)識(shí)到科學(xué)是非常嚴(yán)謹(jǐn)?shù)模绕涫窃谧鰧?shí)驗(yàn)的時(shí)候,要全神貫注,井井有條,否則很容易出差錯(cuò),而這個(gè)小小的差錯(cuò)很有可能就使實(shí)驗(yàn)前功盡棄,既耽誤時(shí)間又浪費(fèi)試劑。
回顧這一學(xué)期我的實(shí)驗(yàn)課程,每一次我都能完成實(shí)驗(yàn)任務(wù)。大多數(shù)都比較順利,小組內(nèi)兩人也大多配合默契,但是有一些美中不足的地方。有的一些實(shí)驗(yàn)比較麻煩,實(shí)驗(yàn)步驟較為繁瑣,我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)時(shí)偶爾會(huì)產(chǎn)生不耐煩的思想,只想著抓緊結(jié)束,但是在這種時(shí)候往往更容易出差錯(cuò)。我有兩次記憶很深,一次是在測(cè)定纖維素酶活力(三硝基水楊酸法)時(shí),沒能及時(shí)貼上空白標(biāo)簽,導(dǎo)致又重新制作空白,拜拜浪費(fèi)了時(shí)間;另一次是在鑒定肌糖原酵解作用時(shí),實(shí)驗(yàn)步驟較為繁瑣,并且老師對(duì)黑板上的簡(jiǎn)易實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行了多個(gè)補(bǔ)充,其中一點(diǎn)是要在水浴后取出大塊肉再加下一步驟的試劑,結(jié)果我們當(dāng)時(shí)產(chǎn)生了不耐煩情緒,就直接加了試劑而沒有取出大肉塊。對(duì)于這兩次情況,雖然對(duì)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有產(chǎn)生什么明顯的影響,但是,它實(shí)實(shí)在在體現(xiàn)了自己的操作并不是很嚴(yán)謹(jǐn),需要注意和努力。
在本學(xué)期生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫中,我重點(diǎn)注意老師強(qiáng)調(diào)的實(shí)驗(yàn)分析部分。上課認(rèn)真聽老師的實(shí)驗(yàn)講解并認(rèn)真記錄有關(guān)的可能實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。在課后撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告時(shí)對(duì)這些點(diǎn)重點(diǎn)分析和總結(jié),有時(shí)甚至是查找相關(guān)資料然后再進(jìn)行分析。通過這一些列的做法,我的實(shí)驗(yàn)分析能力得到了提升,我能在討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果或者實(shí)驗(yàn)操作時(shí)找到更好、更精確的切入點(diǎn),能得出更好的結(jié)論。
同時(shí),本學(xué)期老師將我們分為兩人一組來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),兩人之間的磨合和合作是一種鍛煉,對(duì)今后很有幫助。三、對(duì)于生化實(shí)驗(yàn)課的支持和建議
我非常感謝老師在這一學(xué)期中的辛勤勞動(dòng)。老師在課前為我們做好實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備很不容易,配試劑等都很辛苦。謝謝老師您了。
我覺得咱們的額生化實(shí)驗(yàn)課設(shè)計(jì)的挺好的。兩人一組可以分工合作,加快實(shí)驗(yàn)效率,同時(shí)又避免了因?yàn)橥M同學(xué)人數(shù)多而有的同學(xué)無(wú)事可做的現(xiàn)象。老師在課上講解實(shí)驗(yàn)時(shí),有關(guān)實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)可能結(jié)果、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)的分析、講解和拓展令我獲益匪淺,有利于培養(yǎng)我的實(shí)驗(yàn)思維并且拓寬了知識(shí)視野。
建議方面,我想和老師提的一點(diǎn)建議其實(shí)是有關(guān)實(shí)驗(yàn)器材方面的。對(duì)于老師所提到的有關(guān)節(jié)約試劑、減少材料浪費(fèi)等事項(xiàng)我非常贊同,并且大多數(shù)時(shí)候器材和試劑都很全(這和大一的無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)實(shí)驗(yàn)相比條件進(jìn)步了很多),只是希望咱們的一些其他實(shí)驗(yàn)儀器能更全面一點(diǎn),舉一個(gè)例子,可以使用的紫外分光光度計(jì)只有3臺(tái),有些過少,實(shí)驗(yàn)中要等待的時(shí)間較長(zhǎng),并且有的儀器還不是很準(zhǔn)確,對(duì)于我們的實(shí)驗(yàn)造成了一定的困擾,希望老師能將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有些問題的儀器同一修一修。
總之,我很喜歡咱們的生化實(shí)驗(yàn)課,并且從中學(xué)到了很多知識(shí)、實(shí)驗(yàn)方法和應(yīng)用,鍛煉了實(shí)驗(yàn)操作,形成了實(shí)驗(yàn)要耐心、細(xì)心、恒心的觀念。同時(shí)還培養(yǎng)了團(tuán)隊(duì)意識(shí)和合作觀念。我獲益匪淺。
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山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
姓名王賽賽系年級(jí)組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)題目生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)學(xué)號(hào)201*14140103
生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)
一、實(shí)驗(yàn)感想:
本學(xué)期的十個(gè)生化實(shí)驗(yàn),讓我們學(xué)到了不少新的實(shí)驗(yàn)技能和實(shí)驗(yàn)操
作方法及實(shí)驗(yàn)原理。
酵母RNA的提取及核酸的定量測(cè)定讓我們第一次真正的接觸到了對(duì)于核酸的一些提取、處理、及研究的方法,例如:利用RNA能溶于堿性溶液的原理來(lái)用稀堿法提取RNA,其中對(duì)于樣品的處理,以及提取完畢之后堿的中和、乙醇提取、乙醚濾干等操作方法都是以前沒遇到過的。在核酸的定量測(cè)定試驗(yàn)中,我們同樣鞏固了分光光度計(jì)的使用方法。在蛋白質(zhì)含量測(cè)定的過程中,我們學(xué)習(xí)了兩種方法,一種是folin-酚試劑法,一種是經(jīng)典的凱斯氏定氮法。前者利用folin-酚和酪氨酸和色氨酸的結(jié)合來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量,同時(shí)我們也是第一次接觸到了紫外分光光度計(jì),以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)測(cè)定樣本的蛋白質(zhì)濃度。后者實(shí)驗(yàn)原理比較復(fù)雜,但總體來(lái)說就是將蛋白質(zhì)中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化成無(wú)機(jī)氮(硫酸銨),然后再與堿液反應(yīng),通過測(cè)量氨氣的釋放量來(lái)間接測(cè)得蛋白質(zhì)的含氮量,然后再求蛋白質(zhì)的含量。這次實(shí)驗(yàn)我們學(xué)會(huì)了使用凱氏定氮儀,并且明白了其基本工作原理。本儀器使用方便,效果良好。使用的過程中,由于要長(zhǎng)時(shí)間做大量的重復(fù)測(cè)定,由此也鍛煉了我們堅(jiān)忍不拔的實(shí)驗(yàn)精神,磨練了意志,同時(shí)也經(jīng)過反復(fù)的練習(xí)而增強(qiáng)了有關(guān)該實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)操作技能,如何緩慢山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
姓名王賽賽系年級(jí)組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)題目生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)學(xué)號(hào)201*14140103
加液防止倒吸,如何控制蒸汽發(fā)生器防止暴沸,如何按照順序嚴(yán)格的加入試劑,以及如何進(jìn)行滴定等,通過該實(shí)驗(yàn),對(duì)這些技能都有了進(jìn)一步的了解。在醋酸纖維素薄膜電泳的實(shí)驗(yàn)中,我們主要學(xué)習(xí)到的是在復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)材料處理的過程中如何保持清醒的頭腦,以及完整的思路,這樣才能把實(shí)驗(yàn)做好,并且做的很快。該實(shí)驗(yàn)要配制緩沖液、漂洗液、染色液、透明液,從薄膜的制作,到點(diǎn)樣,處理、電泳等要經(jīng)過一系列復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)操作,每一步都很重要,每一步的處理時(shí)間,處理程度都要靠自己去把握,最后還要經(jīng)過漂洗、冷風(fēng)吹干,最后的處理是要及其小心的,否則會(huì)把薄膜弄破,或者出現(xiàn)皺縮,不平整。如果前期點(diǎn)樣不好,或者染色、電泳過程中稍有不慎,便的不好較好的電泳條帶,出現(xiàn)拖尾,或斷續(xù)的現(xiàn)象。因此,這個(gè)實(shí)驗(yàn)尤其考驗(yàn)我們的操作能力和細(xì)心水平。酶性質(zhì)實(shí)驗(yàn)是我們接觸到為數(shù)不多的一個(gè)定性實(shí)驗(yàn)。
我們從中學(xué)會(huì)了對(duì)于定性測(cè)量的一些處理方法,例如:如何確定最佳ph?如何確定ph梯度比較合適?如何確定最佳保溫時(shí)間?這些問題都從試實(shí)驗(yàn)中得到了解答。最后是通過顏色反應(yīng)來(lái)判斷最適宜ph,準(zhǔn)確判斷顏色深淺是一個(gè)方面,更重要的是顏色指示劑的加入量要絕對(duì)控制好,如果加的太多,則會(huì)使所有的試管顏色偏深,甚至都變成黑色,如果加的太少,那么染色就太淺,變色不明顯,所以,太深太淺都不適于顏色梯度變化的觀察。由此可知,在以后的類似試驗(yàn)中尤其要控制指示劑的加入量,力求達(dá)到一個(gè)最佳的顏色梯度。肌糖原酵山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
姓名王賽賽系年級(jí)組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)題目生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)學(xué)號(hào)201*14140103
解作用實(shí)驗(yàn)中,我們不僅學(xué)到了鑒定糖酵解作用的原理和方法,還學(xué)到了在有關(guān)組織代謝實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)該注意的一些問題。本實(shí)驗(yàn)將肌糖原轉(zhuǎn)變成乳酸,然后通過測(cè)定乳酸的生成量來(lái)反應(yīng)糖原的酵解。實(shí)驗(yàn)最后要經(jīng)過顏色反應(yīng)來(lái)判斷是否有乳酸生成,該反應(yīng)相當(dāng)靈敏,所以實(shí)驗(yàn)儀器要嚴(yán)格的洗干凈。記得我們這次實(shí)驗(yàn)時(shí),第一次由于沒有洗凈試管,所以導(dǎo)致空白組也出現(xiàn)了顏色反應(yīng),后來(lái)老師讓用濃硫酸洗過一次試管,然后才得到了正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這是在這次試驗(yàn)中收獲最大的地方。在纖維素酶活力的測(cè)定試驗(yàn)中,第一次學(xué)習(xí)到了空白對(duì)照實(shí)驗(yàn),知道了空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)的作用,同時(shí)對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線和分光光度計(jì)的使用已經(jīng)比較熟練了。薄膜層析和柱層析實(shí)驗(yàn)都是分離實(shí)驗(yàn),兩種層析方法比較學(xué)習(xí),對(duì)于層析又有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí),柱層析的實(shí)驗(yàn)中,最主要的還是層析柱的制作,和點(diǎn)樣,加樣量不要過大,過大,分離條帶過寬,如果層析柱不夠長(zhǎng),各組分不易分開,易同時(shí)洗脫下來(lái)(本實(shí)驗(yàn)只分離一種色素,不存在此問題);加樣量過少,色帶不是很清楚,不易觀察,效果不好。最后,菲林熱滴定定糖法實(shí)驗(yàn),該實(shí)驗(yàn)也要做空白測(cè)定,將樣品液換成蒸餾水,正確理解空白測(cè)定的作用,然后就是熱滴定過程,該滴定不同于以往的滴定實(shí)驗(yàn),要趁熱滴定,并且要保持滴定時(shí)間一直,防止空氣中的氧氣對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響,還有,提前加入葡萄糖的作用,是為了減少滴定過程中的加入量,縮短滴定時(shí)間,增強(qiáng)滴定準(zhǔn)確度。最后還有在滴定時(shí)候顏色的變化,通過親自的觀察對(duì)顏色的變化深有體會(huì)。山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
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通過這學(xué)期的一系列實(shí)驗(yàn),我們學(xué)到了好多實(shí)驗(yàn)技能,同時(shí)也發(fā)現(xiàn)了不少的問題,以及理論知識(shí)的缺乏,我以后會(huì)更加努力,不斷成長(zhǎng)。
二、72型分光光度計(jì)
1、72型分光光度計(jì)原理:
72型分光光度計(jì)是可見光分光光度計(jì),波長(zhǎng)范圍為420nm~700nm,它由三大部分組成:磁飽和穩(wěn)壓器、光源、單色光器和測(cè)光機(jī)構(gòu)、微電計(jì)。它的基本依據(jù)是朗伯比耳定律,它是根據(jù)相對(duì)測(cè)量原理工作的,即先選定某一溶劑作為標(biāo)準(zhǔn)溶液,設(shè)定其透光率為100%,被測(cè)試樣的透光率是相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言的,即讓單色光分別通過被測(cè)試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液,二者能量的比值就是在一定波長(zhǎng)下對(duì)于被測(cè)試樣的透光率。如圖所示,白色光源經(jīng)入射狹縫、反射鏡和透光鏡后,變成平行光進(jìn)入棱鏡,色散后的單色光經(jīng)鍍鋁的反射鏡反射后,再經(jīng)過透鏡并聚光于出射狹縫上,狹縫寬度為0.32nm。反射鏡和棱鏡組裝在一可旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤上并由波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器的凸輪所帶動(dòng),轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器便可以在出光狹縫后面選擇到任一波長(zhǎng)的單色光。單色光透過樣品吸收池后由一光量調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)為適度的光通量,最后被光電電池吸收,轉(zhuǎn)換成電流后由微電計(jì)指示,從刻度標(biāo)尺上直接讀出透光率的值。2、為什么要做空白?
分光光度計(jì)測(cè)的是溶液的總體吸光度,而待測(cè)溶液中除了待測(cè)物質(zhì)外還有其他的一些雜質(zhì)等,會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)一定的誤差,用空白組調(diào)0.可以消除由于溶液本身的吸光性質(zhì)給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的影響,確保吸光度山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
姓名王賽賽系年級(jí)組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)題目生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)學(xué)號(hào)201*14140103
的差異僅僅是由于溶液中待測(cè)物質(zhì)濃度的不同而引起的。3、T為什么只能用1-100的數(shù),而不能用超過100的數(shù)?
因?yàn)樗硎就腹舛,在調(diào)節(jié)100%之后最大的透過率即使空白的100,其他的只能比空白小,超過100表示光沒有透過樣本而直接穿過空當(dāng),所以不能用超過100的。
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