植物生理生化實驗A 福建農(nóng)林大學 綜合性試驗總結(jié)

福建農(nóng)林大學生命科學學院綜合性實驗總結(jié)

《植物生理生化實驗A》綜合性實驗總結(jié)

(201*－201*學年第一學期)

課程：《植物生理生化實驗A》--生化實驗21學時成績：

學院：植物保護學院專業(yè)：制藥工程年級：11級學號：311510201*姓名：鄭沛才綜合性吸脹與萌發(fā)水稻種子若干生化指標的差異分析實驗項目201*級生物科學（生物學基地班）、生物科學、面向?qū)�業(yè)農(nóng)林生物創(chuàng)新班、農(nóng)學、植保、農(nóng)資、園藝、本項目學時14學時設施、茶學、林學、水保、制藥、生安等本綜合實驗以水稻種子為原料，是個體發(fā)育中最為關鍵的時期，直接影響到后期的實驗內(nèi)容介紹綜合性實驗報告總結(jié)吸脹與萌發(fā)水稻種子若干生化指標的差異分析摘要：以吸脹與萌發(fā)的水稻種子為材料，通過茚三酮試劑顯色法，F(xiàn)olin-酚試劑法，滴定法，活體法等方法測定了不同處理水稻種子的游離氨基酸含量、淀粉酶活性及其過氧化物同工酶特性。結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高；可溶性蛋白質(zhì)含量更高；淀粉酶活性更高；過氧化物同工酶含量更高；種子中各種酶活性提高，各種氨基酸含量升高，明顯有利于促進種子的萌發(fā)。引言植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式進行運輸，所以測定植物組織中不同時期、不同部位游離氨基酸的含量，對于研究根系生理，氮素代謝等有一定意義；蛋白質(zhì)作為細胞中含量最豐富的生物大分子，是生物體結(jié)構(gòu)和功能最重要的基礎物質(zhì)之一。蛋白質(zhì)的含量測定，是植物生理、生化研究中最常用、最基本的分析方法之一；淀粉酶活性高低可以衡量種子萌發(fā)速率，也可以作為水稻抗旱性的生化指標；同工酶譜的差異是基因表達的差異造成的，所以在研究植物基因調(diào)控與生長發(fā)育及其與環(huán)境條件的關系以及許多生意生化和遺傳問題時，常常要分析同工酶譜的差異，因此，同工酶研究在理論和實踐中都有非常重要的意義。研究結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高；可溶性蛋白質(zhì)含量更高；淀粉酶活性更高；過氧化物同工酶含量更高；種子中各種酶活性提高，各種氨基酸含量升高，明顯有利于促進種子的萌發(fā)。1、材料與方法1.1試驗材料從大田或?qū)嶒灥亍⒃囼炂髅笾胁扇≡�始樣品，再按原始樣品的種類分別選出平均樣品。本實驗的使用到的試驗材料為吸脹水稻種子、萌發(fā)水稻種子、水果或蔬菜、甘薯葉柄和葉片。1.2試驗方法

出苗、生長和結(jié)實等。本綜合性實驗要求學生測定吸脹和萌發(fā)水稻種子的若干生化指標，利用植物生理生化理論知識綜合分析兩組種子之間可溶性蛋白質(zhì)含量、游離氨基酸總量、過氧化物同工酶以及淀粉酶的活性等生化指標的差異。福建農(nóng)林大學生命科學學院綜合性實驗總結(jié)

1.2.1游離氨基酸含量測定：采用茚三酮試劑顯色法1.2.2可溶性蛋白質(zhì)含量測定：采用Folin-酚試劑法1.2.3淀粉酶活性測定：采用3,5-二硝基水楊酸顯色法1.2.4過氧化物同工酶測定：采用垂直平板凝膠電泳法2、結(jié)果與分析2.1吸脹與萌發(fā)水稻種子游離氨基酸含量比較處理游離氨基酸含量（單位）吸脹8060（ug/100g）萌發(fā)14270（ug/100g）氨基酸的游離氨基與水合茚三酮作用后，能產(chǎn)生二酮茚胺的取代鹽等藍紫色化合物。在一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與氨基酸的含量成正比。氨基酸脫氨脫羧被氧化，水合茚三酮被還原。結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高。2.2吸脹與萌發(fā)水稻種子可溶性蛋白含量比較處理游離氨基酸含量（單位）吸脹34（ug/g）萌發(fā)47.6（ug/g）在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成紫紅色的蛋白質(zhì)即銅絡合物；此絡合物以及蛋白質(zhì)中絡氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸的殘基使磷鉬酸-磷鎢酸試劑還原，產(chǎn)生深色混合物。在一定條件下，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正相關。結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的可溶性蛋白質(zhì)含量更高。2.3吸脹與萌發(fā)水稻種子淀粉酶活性比較處理總酶活（單位）α淀粉酶活性（單位）β淀粉酶活性（單位）吸脹2.100（mg/gmin）1.012（mg/gmin）0.088（mg/gmin）0.264（mg/gmin）萌發(fā)2.948（mg/gmin）2.684（mg/gmin）淀粉酶產(chǎn)生的還原糖能使3,5-二硝基水楊酸還原，生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸，淀粉酶活力的大小與產(chǎn)生的還原糖的量成正比，可以用麥芽糖制作標準曲線，用比色法測定淀粉生成的還原糖的量，以單位重置樣品在一定時間內(nèi)生成的還原糖的量表示酶活力。幾乎所有植物中都存在有淀粉酶，特別市萌發(fā)后的禾谷類種子淀粉酶活性最強。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶不耐酸，在PH3.6以下迅速鈍化；而β-淀粉酶不耐熱，在70攝氏度15分鐘則被鈍化，根據(jù)它們的這種特性，在測定時鈍化其中之一，就可測出另一個的活力。本實驗采用加熱鈍化β-淀粉酶測出α-淀粉酶的活力，在與非鈍化條件下測定的總活力（α+β）比較，求出β-淀粉酶的活力。

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2.4吸脹與萌發(fā)水稻種子過氧化物同工酶比較處理條帶比移值Rf=a/b吸脹80.03、0.054、0.11、0.16、0.46、0.64、0.84、0.88萌發(fā)70.02、0.06、0.125、0.4、0.52、0.88、0.94被分離物質(zhì)猶豫所載電荷數(shù)量、分子大小和形狀的差異，因此在電泳是產(chǎn)生不同的泳動速率而相互分離。利用過氧化物酶能催化雙氧水吧聯(lián)苯胺氧化成藍色或棕褐色產(chǎn)物的原理，將經(jīng)過電泳后的凝膠至于有雙氧水及聯(lián)苯胺的溶液染色，出現(xiàn)藍色或棕褐色部位即為過氧化物酶同工酶在凝膠中存在的位置，多條有色帶即構(gòu)成過氧化物酶同工酶譜。3、結(jié)論與討論3.1實驗結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高；可溶性蛋白質(zhì)含量更高；淀粉酶活性更高；過氧化物同工酶含量更高；種子中各種酶活性提高，各種氨基酸含量升高，明顯有利于促進種子的萌發(fā)。3.2.通過實驗：了解了氨基酸總量測定的意義及其在本專業(yè)中的應用，掌握了茚三酮十幾顯色法測定氨基酸總量的原理和方法，學會分光光度計的使用方法和標準曲線的繪制方法；了解測定植物體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)的意義和用途，及可溶性蛋白質(zhì)測定的集中方法，掌握了Folin-酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量的原理及要點；了解α-淀粉酶和β-淀粉酶的不同點及其淀粉酶活性測定的意義，掌握了很溫水浴的控溫方法，學會用3,5-二硝基水楊酸顯色法測定淀粉酶活性的原理及其操作要點，及不同處理的萌發(fā)種子淀粉酶活性的差異；了解了同工酶研究在理論和實踐中的重要意義，了解了聚丙烯酰胺凝膠中各種化學試劑的作用，通過本實驗掌握了電泳技術的原理、方法、凝膠配制、染色方法等等，熟悉垂直平板凝膠電泳裝置、操作方法。比較不同處理的萌發(fā)種子過氧化物酶譜的差異。參考文獻王學奎，植物生理生化實驗原理和技術（第2版），北京：高等教育出版社，201*柯玉琴，植物生理生化實驗，，201*/12/3指導教師評語：指導教師簽名：年月日

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(201*－201*學年第一學期)

課程：《植物生理生化實驗》--生化實驗21學時成績：學院：林學院專業(yè)：林學年級：10級學號：102253007040姓名：陳薇

綜合性實驗項目面向?qū)�業(yè)吸脹與萌發(fā)水稻種子若干生化指標的差異分析10級農(nóng)學、植保、農(nóng)資、園藝、設施、茶學、本項目學時14學時林學、水保、制藥、生安等種子萌發(fā)是種子植物生長發(fā)育過程中的早期階段，是個體發(fā)育中最為關鍵的時期，直接影響到后期的出苗、生長和結(jié)實等。本綜合性實驗要求學生測定吸脹和萌發(fā)水稻種子的若干生化指標，利用植物生理生化理論知識綜合分析兩組種子之間可溶性蛋白質(zhì)含量、游離氨基酸總量、過氧化物同工酶以及淀粉酶的活性等生化指標的差異。綜合性實驗報告總結(jié)吸脹與萌發(fā)水稻種子若干生化指標的差異分析摘要：以吸脹與萌發(fā)的水稻種子為材料，通過茚三酮試劑顯色法，F(xiàn)olin-酚試劑法，滴定法，活體法等方法測定了不同處理水稻種子的游離氨基酸含量、淀粉酶活性及其過氧化物同工酶特性。結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高；可溶性蛋白質(zhì)含量更高；淀粉酶活性更高；過氧化物同工酶含量更高；種子中各種酶活性提高，各種氨基酸含量升高，明顯有利于促進種子的萌發(fā)。引言植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式進行運輸，所以測定植物組織中不同時期、不同部位游離氨基酸的含量，對于研究根系生理，氮素代謝等有一定意義；蛋白質(zhì)作為細胞中含量最豐富的生物大分子，是生物體結(jié)構(gòu)和功能最重要的基礎物質(zhì)之一。蛋白質(zhì)的含量測定，是植物生理、生化研究中最常用、最基本的分析方法之一；淀粉酶活性高低可以衡量種子萌發(fā)速率，也可以作為水稻抗旱性的生化指標；同工酶譜的差異是基因表達的差異造成的，所以在研究植物基因調(diào)控與生長發(fā)育及其與環(huán)境條件的關系以及許多生意生化和遺傳問題時，常常要分析同工酶譜的差異，因此，同工酶研究在理論和實踐中都有非常重要的意義。研究結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高；可溶性蛋白質(zhì)含量更高；淀粉酶活性更高；過氧化物同工酶含量更高；種子中各種酶活性提高，各種氨基酸含量升高，明顯有利于促進種子的萌發(fā)。1、材料與方法1.1試驗材料從大田或?qū)嶒灥�、試驗器皿中采取原始樣品，再按原始樣品的種類分別選出平均樣品。本實驗的使用到的試驗材料為吸脹水稻種子、萌發(fā)水稻種子、水果或蔬菜、甘薯葉柄和葉片。

實驗內(nèi)容介紹福建農(nóng)林大學生命科學學院綜合性實驗總結(jié)

1.2試驗方法1.2.1游離氨基酸含量測定：采用茚三酮試劑顯色法1.2.2可溶性蛋白質(zhì)含量測定：采用Folin-酚試劑法1.2.3淀粉酶活性測定：采用3,5-二硝基水楊酸顯色法1.2.4過氧化物同工酶測定：采用垂直平板凝膠電泳法2、結(jié)果與分析2.1吸脹與萌發(fā)水稻種子游離氨基酸含量比較處理游離氨基酸含量（單位）吸脹8060（ug/100g）萌發(fā)14270（ug/100g）氨基酸的游離氨基與水合茚三酮作用后，能產(chǎn)生二酮茚胺的取代鹽等藍紫色化合物。在一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與氨基酸的含量成正比。氨基酸脫氨脫羧被氧化，水合茚三酮被還原。結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高。2.2吸脹與萌發(fā)水稻種子可溶性蛋白含量比較處理游離氨基酸含量（單位）吸脹34（ug/g）萌發(fā)47.6（ug/g）在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成紫紅色的蛋白質(zhì)即銅絡合物；此絡合物以及蛋白質(zhì)中絡氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸的殘基使磷鉬酸-磷鎢酸試劑還原，產(chǎn)生深色混合物。在一定條件下，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正相關。結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的可溶性蛋白質(zhì)含量更高。2.3吸脹與萌發(fā)水稻種子淀粉酶活性比較處理總酶活（單位）α淀粉酶活性（單位）β淀粉酶活性（單位）吸脹2.100（mg/gmin）1.012（mg/gmin）0.088（mg/gmin）0.264（mg/gmin）萌發(fā)2.948（mg/gmin）2.684（mg/gmin）淀粉酶產(chǎn)生的還原糖能使3,5-二硝基水楊酸還原，生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸，淀粉酶活力的大小與產(chǎn)生的還原糖的量成正比，可以用麥芽糖制作標準曲線，用比色法測定淀粉生成的還原糖的量，以單位重置樣品在一定時間內(nèi)生成的還原糖的量表示酶活力。幾乎所有植物中都存在有淀粉酶，特別市萌發(fā)后的禾谷類種子淀粉酶活性最強。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶不耐酸，在PH3.6以下迅速鈍化；而β-淀粉酶不耐熱，在70攝氏度15分鐘則被鈍化，根據(jù)它們的這種特性，在測定時鈍化其中之一，就可測出另一個的活力。本實驗采用加熱鈍化β-淀粉酶測出α-淀粉酶的活力，在與非鈍化條件下測定的總活力（α+β）比較，求出β-淀粉酶的活力。

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2.4吸脹與萌發(fā)水稻種子過氧化物同工酶比較處理條帶比移值Rf=a/b吸脹80.03、0.054、0.11、0.16、0.46、0.64、0.84、0.88萌發(fā)70.02、0.06、0.125、0.4、0.52、0.88、0.94被分離物質(zhì)猶豫所載電荷數(shù)量、分子大小和形狀的差異，因此在電泳是產(chǎn)生不同的泳動速率而相互分離。利用過氧化物酶能催化雙氧水吧聯(lián)苯胺氧化成藍色或棕褐色產(chǎn)物的原理，將經(jīng)過電泳后的凝膠至于有雙氧水及聯(lián)苯胺的溶液染色，出現(xiàn)藍色或棕褐色部位即為過氧化物酶同工酶在凝膠中存在的位置，多條有色帶即構(gòu)成過氧化物酶同工酶譜。3、結(jié)論與討論3.1實驗結(jié)果表明：與吸脹水稻種子相比，萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高；可溶性蛋白質(zhì)含量更高；淀粉酶活性更高；過氧化物同工酶含量更高；種子中各種酶活性提高，各種氨基酸含量升高，明顯有利于促進種子的萌發(fā)。3.2.通過實驗：了解了氨基酸總量測定的意義及其在本專業(yè)中的應用，掌握了茚三酮十幾顯色法測定氨基酸總量的原理和方法，學會分光光度計的使用方法和標準曲線的繪制方法；了解測定植物體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)的意義和用途，及可溶性蛋白質(zhì)測定的集中方法，掌握了Folin-酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量的原理及要點；了解α-淀粉酶和β-淀粉酶的不同點及其淀粉酶活性測定的意義，掌握了很溫水浴的控溫方法，學會用3,5-二硝基水楊酸顯色法測定淀粉酶活性的原理及其操作要點，及不同處理的萌發(fā)種子淀粉酶活性的差異；了解了同工酶研究在理論和實踐中的重要意義，了解了聚丙烯酰胺凝膠中各種化學試劑的作用，通過本實驗掌握了電泳技術的原理、方法、凝膠配制、染色方法等等，熟悉垂直平板凝膠電泳裝置、操作方法。比較不同處理的萌發(fā)種子過氧化物酶譜的差異。參考文獻王學奎，植物生理生化實驗原理和技術（第2版），北京：高等教育出版社，201*柯玉琴，植物生理生化實驗，，201*/12/3指導教師評語：指導教師簽名：年月日

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