植物生化實(shí)驗(yàn)》綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)
福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)
《植物生理生化實(shí)驗(yàn)》綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)
(201*-201*學(xué)年第一學(xué)期)
課程:《植物生理生化實(shí)驗(yàn)》--生化實(shí)驗(yàn)21學(xué)時(shí)成績(jī):學(xué)院:專業(yè):年級(jí):學(xué)號(hào):姓名:
綜合性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目面向?qū)I(yè)吸脹與萌發(fā)水稻種子若干生化指標(biāo)的差異分析10級(jí)農(nóng)學(xué)、植保、農(nóng)資、園藝、設(shè)施、茶學(xué)、林學(xué)、水保、制藥、生安等本項(xiàng)目學(xué)時(shí)14學(xué)時(shí)種子萌發(fā)是種子植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的早期階段,是個(gè)體發(fā)育中最為關(guān)鍵的時(shí)期,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容介紹直接影響到后期的出苗、生長(zhǎng)和結(jié)實(shí)等。本綜合性實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生測(cè)定吸脹和萌發(fā)水稻種子的若干生化指標(biāo),利用植物生理生化理論知識(shí)綜合分析兩組種子之間可溶性蛋白質(zhì)含量、游離氨基酸總量、過(guò)氧化物同工酶以及淀粉酶的活性等生化指標(biāo)的差異。綜合性實(shí)驗(yàn)報(bào)告總結(jié)福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)
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福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)
《植物生理生化實(shí)驗(yàn)》綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)
(201*-201*學(xué)年第一學(xué)期)
課程:《植物生理生化實(shí)驗(yàn)》--生化實(shí)驗(yàn)21學(xué)時(shí)成績(jī):學(xué)院:林學(xué)院專業(yè):林學(xué)年級(jí):10級(jí)學(xué)號(hào):102253007040姓名:陳薇
綜合性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目面向?qū)I(yè)吸脹與萌發(fā)水稻種子若干生化指標(biāo)的差異分析10級(jí)農(nóng)學(xué)、植保、農(nóng)資、園藝、設(shè)施、茶學(xué)、本項(xiàng)目學(xué)時(shí)14學(xué)時(shí)林學(xué)、水保、制藥、生安等種子萌發(fā)是種子植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的早期階段,是個(gè)體發(fā)育中最為關(guān)鍵的時(shí)期,直接影響到后期的出苗、生長(zhǎng)和結(jié)實(shí)等。本綜合性實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生測(cè)定吸脹和萌發(fā)水稻種子的若干生化指標(biāo),利用植物生理生化理論知識(shí)綜合分析兩組種子之間可溶性蛋白質(zhì)含量、游離氨基酸總量、過(guò)氧化物同工酶以及淀粉酶的活性等生化指標(biāo)的差異。綜合性實(shí)驗(yàn)報(bào)告總結(jié)吸脹與萌發(fā)水稻種子若干生化指標(biāo)的差異分析摘要:以吸脹與萌發(fā)的水稻種子為材料,通過(guò)茚三酮試劑顯色法,F(xiàn)olin-酚試劑法,滴定法,活體法等方法測(cè)定了不同處理水稻種子的游離氨基酸含量、淀粉酶活性及其過(guò)氧化物同工酶特性。結(jié)果表明:與吸脹水稻種子相比,萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高;可溶性蛋白質(zhì)含量更高;淀粉酶活性更高;過(guò)氧化物同工酶含量更高;種子中各種酶活性提高,各種氨基酸含量升高,明顯有利于促進(jìn)種子的萌發(fā)。引言植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式進(jìn)行運(yùn)輸,所以測(cè)定植物組織中不同時(shí)期、不同部位游離氨基酸的含量,對(duì)于研究根系生理,氮素代謝等有一定意義;蛋白質(zhì)作為細(xì)胞中含量最豐富的生物大分子,是生物體結(jié)構(gòu)和功能最重要的基礎(chǔ)物質(zhì)之一。蛋白質(zhì)的含量測(cè)定,是植物生理、生化研究中最常用、最基本的分析方法之一;淀粉酶活性高低可以衡量種子萌發(fā)速率,也可以作為水稻抗旱性的生化指標(biāo);同工酶譜的差異是基因表達(dá)的差異造成的,所以在研究植物基因調(diào)控與生長(zhǎng)發(fā)育及其與環(huán)境條件的關(guān)系以及許多生意生化和遺傳問(wèn)題時(shí),常常要分析同工酶譜的差異,因此,同工酶研究在理論和實(shí)踐中都有非常重要的意義。研究結(jié)果表明:與吸脹水稻種子相比,萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高;可溶性蛋白質(zhì)含量更高;淀粉酶活性更高;過(guò)氧化物同工酶含量更高;種子中各種酶活性提高,各種氨基酸含量升高,明顯有利于促進(jìn)種子的萌發(fā)。1、材料與方法1.1試驗(yàn)材料從大田或?qū)嶒?yàn)地、試驗(yàn)器皿中采取原始樣品,再按原始樣品的種類分別選出平均樣品。本實(shí)驗(yàn)的使用到的試驗(yàn)材料為吸脹水稻種子、萌發(fā)水稻種子、水果或蔬菜、甘薯葉柄和葉片。
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容介紹福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院綜合性實(shí)驗(yàn)總結(jié)
1.2試驗(yàn)方法1.2.1游離氨基酸含量測(cè)定:采用茚三酮試劑顯色法1.2.2可溶性蛋白質(zhì)含量測(cè)定:采用Folin-酚試劑法1.2.3淀粉酶活性測(cè)定:采用3,5-二硝基水楊酸顯色法1.2.4過(guò)氧化物同工酶測(cè)定:采用垂直平板凝膠電泳法2、結(jié)果與分析2.1吸脹與萌發(fā)水稻種子游離氨基酸含量比較處理游離氨基酸含量(單位)吸脹8060(ug/100g)萌發(fā)14270(ug/100g)氨基酸的游離氨基與水合茚三酮作用后,能產(chǎn)生二酮茚胺的取代鹽等藍(lán)紫色化合物。在一定范圍內(nèi),其顏色的深淺與氨基酸的含量成正比。氨基酸脫氨脫羧被氧化,水合茚三酮被還原。結(jié)果表明:與吸脹水稻種子相比,萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高。2.2吸脹與萌發(fā)水稻種子可溶性蛋白含量比較處理游離氨基酸含量(單位)吸脹34(ug/g)萌發(fā)47.6(ug/g)在堿性條件下,蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成紫紅色的蛋白質(zhì)即銅絡(luò)合物;此絡(luò)合物以及蛋白質(zhì)中絡(luò)氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸的殘基使磷鉬酸-磷鎢酸試劑還原,產(chǎn)生深色混合物。在一定條件下,顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正相關(guān)。結(jié)果表明:與吸脹水稻種子相比,萌發(fā)水稻種子的可溶性蛋白質(zhì)含量更高。2.3吸脹與萌發(fā)水稻種子淀粉酶活性比較處理總酶活(單位)α淀粉酶活性(單位)β淀粉酶活性(單位)吸脹2.100(mg/gmin)1.012(mg/gmin)0.088(mg/gmin)0.264(mg/gmin)萌發(fā)2.948(mg/gmin)2.684(mg/gmin)淀粉酶產(chǎn)生的還原糖能使3,5-二硝基水楊酸還原,生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸,淀粉酶活力的大小與產(chǎn)生的還原糖的量成正比,可以用麥芽糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,用比色法測(cè)定淀粉生成的還原糖的量,以單位重置樣品在一定時(shí)間內(nèi)生成的還原糖的量表示酶活力。幾乎所有植物中都存在有淀粉酶,特別市萌發(fā)后的禾谷類種子淀粉酶活性最強(qiáng)。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶不耐酸,在PH3.6以下迅速鈍化;而β-淀粉酶不耐熱,在70攝氏度15分鐘則被鈍化,根據(jù)它們的這種特性,在測(cè)定時(shí)鈍化其中之一,就可測(cè)出另一個(gè)的活力。本實(shí)驗(yàn)采用加熱鈍化β-淀粉酶測(cè)出α-淀粉酶的活力,在與非鈍化條件下測(cè)定的總活力(α+β)比較,求出β-淀粉酶的活力。
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2.4吸脹與萌發(fā)水稻種子過(guò)氧化物同工酶比較處理?xiàng)l帶比移值Rf=a/b吸脹80.03、0.054、0.11、0.16、0.46、0.64、0.84、0.88萌發(fā)70.02、0.06、0.125、0.4、0.52、0.88、0.94被分離物質(zhì)猶豫所載電荷數(shù)量、分子大小和形狀的差異,因此在電泳是產(chǎn)生不同的泳動(dòng)速率而相互分離。利用過(guò)氧化物酶能催化雙氧水吧聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)色或棕褐色產(chǎn)物的原理,將經(jīng)過(guò)電泳后的凝膠至于有雙氧水及聯(lián)苯胺的溶液染色,出現(xiàn)藍(lán)色或棕褐色部位即為過(guò)氧化物酶同工酶在凝膠中存在的位置,多條有色帶即構(gòu)成過(guò)氧化物酶同工酶譜。3、結(jié)論與討論3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與吸脹水稻種子相比,萌發(fā)水稻種子的游離氨基酸含量更高;可溶性蛋白質(zhì)含量更高;淀粉酶活性更高;過(guò)氧化物同工酶含量更高;種子中各種酶活性提高,各種氨基酸含量升高,明顯有利于促進(jìn)種子的萌發(fā)。3.2.通過(guò)實(shí)驗(yàn):了解了氨基酸總量測(cè)定的意義及其在本專業(yè)中的應(yīng)用,掌握了茚三酮十幾顯色法測(cè)定氨基酸總量的原理和方法,學(xué)會(huì)分光光度計(jì)的使用方法和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法;了解測(cè)定植物體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)的意義和用途,及可溶性蛋白質(zhì)測(cè)定的集中方法,掌握了Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理及要點(diǎn);了解α-淀粉酶和β-淀粉酶的不同點(diǎn)及其淀粉酶活性測(cè)定的意義,掌握了很溫水浴的控溫方法,學(xué)會(huì)用3,5-二硝基水楊酸顯色法測(cè)定淀粉酶活性的原理及其操作要點(diǎn),及不同處理的萌發(fā)種子淀粉酶活性的差異;了解了同工酶研究在理論和實(shí)踐中的重要意義,了解了聚丙烯酰胺凝膠中各種化學(xué)試劑的作用,通過(guò)本實(shí)驗(yàn)掌握了電泳技術(shù)的原理、方法、凝膠配制、染色方法等等,熟悉垂直平板凝膠電泳裝置、操作方法。比較不同處理的萌發(fā)種子過(guò)氧化物酶譜的差異。參考文獻(xiàn)王學(xué)奎,植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)(第2版),北京:高等教育出版社,201*柯玉琴,植物生理生化實(shí)驗(yàn),,201*/12/3指導(dǎo)教師評(píng)語(yǔ):指導(dǎo)教師簽名:年月日
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